無塵無菌車間環境快速測定法

1.無塵無菌車間菌落染色法

在含有氧化還原顯色試劑四唑嗡紫羅蘭等的瓊脂平板培養基上培養微生物，或者在普通的瓊脂平板培養基上培養后，經過染色，很容易判別菌落，是一種比標準培養時間更短的計測菌落的方法。

微觀染色用于對培養結束的膜過濾器直接滴下染色液，然后讓其干燥，將染成青色的菌落拿到10~20倍的放大鏡下進行計測。培養時間可以縮短到原來方法的1/2~1/40。例如：大腸菌經過4~6h的培養就可以檢測出來。

2.阻抗法

微生物在增殖過程中會將蛋白質、碳水化合物等高分子化合物分解成有機酸、氨基酸等離子化合物，這些離子化合物達到一定濃度，在周圍環境中將產生微小的電量變化。將這個電量的變化利用電阻、導電性或者靜電容量這些概念檢測的方法，稱作阻抗法。產生電量變化的時間與開始時的細菌數、菌的增殖性成反比，因此從預先求得的兩者的標準曲線中可以推算出樣品中初始的細菌數。作為產品化的系統有氣壓(或液壓)傳輸系統以及細菌計數器。

實際操作如下：向專用容器中添加液體培養基和樣品，放在組成系統的培養裝置中，開始培養。測定機逐時自動監測培養過程中電量的變化。

本測定方法須培養，但它和原來計測菌落的方法相比，優點在于培養時間可以縮短。培養開始后直到結果的打印輸出完全自動化，初投資高但運行費用低，另外通過組合選擇性培養基，還可應用于檢測特定微生物。

3.氧化電極法

氧化電極法是一種將微生物增殖過程中的呼吸活性，通過氧化電極檢出的方法。和阻抗法一樣，通過自動監測，隨著培養進度逐時地測定，所產生的培養基中溶解氧的濃度，直到能夠檢出呼吸活性的培養時間，從這一時間推算樣品中的開始菌數。

測定時向裝有氧化電極的專用容器中添加液體培養基和樣品，然后放在組成系統的培養裝置中開始培養，測定機自動監測培養基中溶解氧濃度的逐時變化。6h內就可以檢出105CFU/g的開始菌數。

4.無塵無菌車間顯色法

顯色法是一種通過標識色素的色調變化，來檢測隨微生物代謝產生的培養基pH值的變化和CO₂生成的方法。通過自動監測檢測出培養過程中標識色素的色調變化，從直到可以檢測出色調變化的這一段培養時間推算出樣品中的開始菌數。以培養基pH值變化為指標的維夫斯、以CO₂生成為指標的敏化培養基/生物材料都已產品化。中凈環球凈化可提供無塵車間、無菌車間的咨詢、規劃、設計、施工、安裝改造等配套服務。

以上4種方法仍需培養，只是培養時間較傳統方式縮短，有助于改善生物污染控制的工作效率，屬于一類。以下幾種方法則無需培養，屬于另一類環境微生物快速測定法。

5.熒光染色法

利用熒光染色劑熒光染色細胞膜和細胞核等，使用熒光顯微鏡等檢出方法。染色機理不同的多種熒光染色劑，根據不同的組合也能識別出。染色掃描RDI及D計數、真菌監視器掃描、生物絮凝等都已產品化。

染色掃描RDI在薄膜過濾器上過濾樣品，熒光染色被阻擋在薄膜過濾器上的微生物后，再進行激光掃描。熒光染色的30min，激光掃描3min即可結束。其結果可以作為圖像表示在監測器畫面上，也可以自動計測產生熒光的點數。D計數以及真菌監視器掃描是結合了熒光染色法與流體檢查計數法的方法，可以連續測定液態樣品。

6.SLP(Silkworm Larvae Plasma)試驗法

SLP試驗法是利用蠶血液成分檢出肽聚糖及β-葡聚糖(多縮葡萄糖)的方法。肽聚糖是細菌的細胞壁成分，β-葡聚糖是真菌的細胞壁成分，因此通過本試驗法能夠檢出這些微生物。不過每個微生物的肽聚糖及β-葡聚糖含量因菌株的不同而差異很大，與LAL試驗法一樣，不能定量微生物，而且也不能識別出是來源于活菌還是來源于菌。

7.無塵無菌車間ATP(Adenosine Triphos Phate)快速測定法

ATP是高能磷酸化合物，分解時產生的能量用于細胞內各種有能量需求的反應。即ATP在所有活著的細胞內發揮著類似于電池的功能，它的存在成為生命活動的證據。

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